Sjálfstæðisflokkurinn, Framsóknarflokkurinn, Miðflokkurinn og Flokkur fólksins eru allir andvígir ESB-aðild og héldu samtals um 33–35 af 63 þingsætum eftir kosningar 2024. Sjálfstæðisflokkurinn hefur verið harðastur í andstöðunni og vísar til fullveldis og sjávarútvegsmála, en Framsóknarflokkurinn leggur áherslu á landbúnaðar- og sjávarútvegsstefnu.

Vinstrihreyfingin – grænt framboð og Píratar hafa ekki samræmda afstöðu til ESB-aðildar. VG er klofið á milli umhverfis- og fullveldisálits og styður þjóðaratkvæðagreiðslu án þess að taka afstöðu, en Píratar leggja áherslu á beint lýðræði og halda sig hlutlausa þótt einstakir þingmenn halli í báðar áttir.